用液氮罐冻存细胞需要做哪些准备工作，有哪些操作步骤呢？
一、物品准备
超净工作台、酒精灯、废液缸、移液枪、培养瓶或培养皿、培养基、15ml离心管、0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）、0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA混合消化液、二氧化碳培养箱、倒置显微镜、DMSO、胎牛血清、离心机、冻存管等。
二、步骤
1.配制含10%DMSO冻存培养液（DMSO:FBS=1:9或DMSO:FBS:培养基=1：2：7）。
2.取对数生长期细胞，去除旧培养液，用PBS清洗1-2次。
3.去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来。
4.将细胞悬液转移到15ml离心管中，并置于离心机中，800-1000rpm，室温离心5分钟。
5.去除细胞上清，加入适量配置好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀、计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5.0x106 /ml－1.0x107 /ml。
6.将细胞分装入冻存管中，每管1-1.5ml。
7.将冻存管上标明细胞名称及代数、冻存时间、操作姓名。
8.冻存：标准的冻存程序为降温速率4℃（30min）→ -20℃（1h）→ -80℃（过夜，至少8小时为宜）→ 液氮罐
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