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多糖提取的除蛋白环节如何去除三氯乙酸

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xu2018553261 发表于 2023-3-25 17:25:53 | 显示全部楼层 |阅读模式
多糖提取的除蛋白环节如何去除三氯乙酸
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高山仰止 发表于 2023-4-18 09:57:12 | 显示全部楼层
多糖分子量大，三氟乙酸分子量小，可以透析出去
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mazhenfeng 发表于 2023-5-2 10:42:53 | 显示全部楼层
在多糖提取过程中，使用三氯乙酸(TCA)可沉淀蛋白质。然而，在沉淀蛋白质的同时，TCA残留在样品中，对多糖分析的影响显然是不可接受的。为了去除多糖提取中残留的TCA，可以采取以下方法：

1.  洗涤沉淀物：将蛋白质沉淀物离心、去液后，使用氧化乙酸或醋酸盐缓冲液（pH7.0-8.0）洗涤数次，离心去液，最终得到洗净沉淀物。

2.  乙醇洗脱：先用生理盐水溶解沉淀物，然后加入等体积的75%乙醇/water混合物，室温下反复混匀搅拌和沉淀。离心去液后，用乙醇/water混合物洗涤沉淀物数次，离心去液收集沉淀物。最后用无特殊处理纯水或混合物-6倍量（体积比）水的混合物中再重悬样品即可。

3.  残留TCA酸碱中和法：用0.1mol/L且pH为7的氢氧化钠或盐酸酸化钠缓冲液混合物反复洗涤，直至洗涤物的pH值稳定在中性以上。

需要提醒的是，用NaOH或HCl中和TCA的过程中，将会在样品中引入一定量的盐酸或氢氧化钠。因此，在进行多糖定量时会影响测量结果，需要对结果进行修正。
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