优化慢病毒载体的生产和感染条件以便于在原代人 T 细胞中实现高转导效率(一)

xzy9494 发表于 2023-4-23 13:19:20 | 显示全部楼层 |阅读模式

Simplified production and concentration of lentiviral vectors to achieve high transduction in primary human T cells

包病毒过程优化实验条件:1.lipofectamine和Calcium phosphate比较2转染是是否加入sodium butyrate3.Cacium phosphate浓度优化
实验结果:1.不加sodium butyrate时,lipofectamine较好2.加sodium butyrate时,差不多3.Cacium phosphate有个最佳浓度。
病毒浓缩实验条件:
1.超离速度:90000g、20000g、6400g
2.密度梯度浓缩 (Optiprep) 或超滤 (Mustang Q Acrodisc) 比较
实验结果:
1.
20000g超速离心的方法,又便宜效果又好

T细胞培养条件实验条件:1.激活T细胞
2.人血清跟FCS相比
3.不同激活时间点进行感染

实验结果:
1.激活的T细胞好感染。
2.人血清比FCS好。
3.不同激活时间点,阳性率差不多,但是24h的时候MFI最高。

总结总之,T细胞要激活增殖的状态,病毒质量要好​。
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