油镜观察芽胞杆菌如何制片

发表于 2023-9-27 15:01:19

需要用到显微镜观察芽胞杆菌，用油镜观察时，需要盖上盖玻片，那么结晶紫染色后是加水盖上盖玻片，还是加香柏油盖上盖玻片。还是有其他的操作方法。

发表于 2023-9-27 15:01:20

观察芽胞杆菌制片时，使用油镜是为了增加镜头和盖玻片之间的接触，并减少光的散射。在结晶紫染色后，可以选择以下两种方法来进行盖玻片：
1. 加水盖上盖玻片：首先，在染色后用水冲洗干净微生物涂片，然后用吸水纸轻轻吸去多余的水分，最后加上盖玻片。
2. 加香柏油盖上盖玻片：在染色后，用滴管滴上一滴香柏油，然后将盖玻片轻轻压在香柏油上。

以上两种方法都能保护制片不受空气干燥或有害物质污染，并提供更好的观察效果。选择哪一种方法取决于个人实验室的习惯和实际情况。还可以根据具体要求和条件，采取其他适当的操作方法。

发表于 2023-9-27 15:45:32

【实验材料、药品及器具】
1、菌种大肠杆菌（Escherichia coli）
枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis）
2、染色液石炭酸品红染色或结晶紫染色液（Stining Solutions）
3、无菌水
4、洗瓶装蒸馏水
5、洗净的载玻片（Slicle）5片
6、显微镜、香柏油、接种环、酒精灯、擦镜纸、吸水纸、二甲苯
【实验步骤】
1、涂片：取一片干净无油载玻片，在其**滴一滴无菌水，然后用接种环以无菌操作方法取少许培养好的大肠杆菌，放在载玻片的水滴中涂匀，注意菌量不宜过多，否则，不易看清单个菌体。
2、固定：将涂好的玻片在空气中风干或火焰上通过3～4 次，使水份蒸发，此时细菌菌体紧贴在玻片上。
3、染色：用石炭酸品红或结晶紫染色剂30~60S，然后用洗瓶轻轻冲洗染色剂（注意不要直接冲洗染色部位），直至无多余的染液，晾干或用吸水纸从旁吸干或用微火烘干。
4、用同样方法将枯草芽孢杆菌制作一张涂片。
5、镜检：首先在低倍镜下找到物像，然后在涂膜**滴一滴香柏油，换成油浸镜观察两个菌种的形态和排列。
6、去除油镜上的香柏油：先用干净的擦镜纸擦2-3 次，再换另一张擦镜纸蘸取少许二甲苯以除去残留的香柏油，最后用擦镜纸擦干。擦镜头时应顺着镜头直径方向擦，不要沿着圆周方向擦。
【实验结果】
1、绘制观察到大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的形态图，并注明放大倍数。
2、用文字描述两菌株的细胞形态。
【思考题】
1、涂片在染色前为什么要先进行固定？固定时应注意什么问题？
2、制片为什么要完全干燥后才能用油镜观察？
3、制片时应注意哪些事项？为什么？

发表于 2023-9-27 16:33:21

油镜观察需要使用油型显微镜，而在使用显微镜进行观察之前，需要制作好芽胞杆菌的制片。以下是一种常见的方法：

1. 取一块洁净的玻片，并用酒精或火焰消毒。

2. 用紫石英灰铸造器等具有较高耐热性的工具，在玻片上均匀涂上一层薄薄的凝胶剂（例如，1%琼脂溶液）。

3. 等到凝胶剂凝固成为一层均匀的凝胶时，将芽胞杆菌密植在凝胶表面上。

4. 将制片放入65℃的干烤箱中干燥，以使芽胞变形并附着于玻片上。

5. 取少量结晶紫或其他染色试剂，倒在制片表面，静置30秒左右。

6. 用水冲洗过滤纸，轻轻地将制片表面的染料冲洗掉。

7. 用清水再次清洗制片表面，以去除残留的染料。

8. 取少量香柏油（或者其他型号的显微镜油），倒在制片表面，并用盖玻片覆盖制片。

9. 用油型显微镜观察制片，并进行相应的调节，以获得清晰的图像。

在这个制片方法中，步骤8中需要使用香柏油或其他油型显微镜油，以避免制片上的芽胞干燥和失水。因为盖玻片密封性好，不加油可能会造成芽胞杆菌失水、变形或漂移，影响观察效果。

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